酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA試劑盒因其操作簡單，靈敏度高，特異性好，經(jīng)濟(jì)安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應(yīng)用，但是由于其操作步驟復(fù)雜，一般包括試劑準(zhǔn)備，樣本收集，加樣，溫育，洗滌，顯色，比色，結(jié)果判定等，其中任何一項(xiàng)操作不當(dāng)都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此，必須加強(qiáng)ELISA檢測的全面質(zhì)量控制，保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響因素包括檢測樣品因素、操作因素等。在實(shí)驗(yàn)操作的過程中有一些技術(shù)要點(diǎn)。
ELISA試劑盒操作
1、加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
2、作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
3、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4、同批號試劑組分不得混用。
5、洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
7、要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定。
8、在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
9、吸取液體時
速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
10、手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
11、底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
ELISA檢測操作步驟復(fù)雜，ELISA試劑盒可能會影響測定結(jié)果的因素較多，分布在測定操作的各個步驟中，因此必須加強(qiáng)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。